Mejores peptídeos para la investigación de la artritis reumatoide: TNF- Alfa y IL-6

Este centro está publicado para el uso de la investigación solamente (RUO) y se ocupa de la biología preclínica de la artritis reumatoide. Es completamente distinto del contenido de neuroinflamación de ictus (ID 77529), el IBD contenido de citocinas de mucosa (ID 77523), la insuficiencia cardíaca NLRP3 Contenido (ID 77527), y todos los puestos anteriores de esta serie. El pannus sinovial, RA sinoviocitos (FLS) y la biología de la erosión conjunta discutida aquí no se comparte con ningún post anterior. Ningún contenido constituye asesoramiento médico, orientación clínica o promoción del uso terapéutico en humanos o animales.

Introducción: RA como enfermedad autoinmune destructiva sinovial

Artritis reumatoide (RA) es una enfermedad autoinmune sistémica crónica que afecta aproximadamente el 1% de la población activa. UK población adulta, caracterizada por sinovitis poliarticular simétrica que conduce a erosión progresiva del cartílago, destrucción ósea subcondral y discapacidad funcional. RA la patogénesis implica: 1) Presentación de autoantigénio (ACPA/anticuerpos anticitrulinados de proteínas que apuntan al fibrinogénio citrulinado, colágeno II, vimentina — generada por PAD4-mediated citrulinización y MHC clase II HLA-DRB1*04:01/*04:04 SE presentación de epítopos); (2) Tormenta de citocinas en la membrana sinovial (TNF-α, IL-6, IL-1β, IL-17A, GM- ¿Qué?CSF cascada; 3) Fibroblasto sinovial (FLS — transformación de los sinoviocitos similares a los fibroblastos en un fenotipo invasivo, que forma pannus y erosiona el cartílago; (4) Osteoclastogénesis impulsada por RANKL sobreexpresión en FLS y Th17 celdas; y (5) complementan la activación de la afluencia de neutrófilos y la trampa extracelular de neutrófilos (NET) formación en líquido sinovial. Investigadores que estudian intervenciones mediadas por péptidos en RA debe comprometerse con el sinoviocito como célula principal efectora, distinta de los macrófagos, células T o células B, porque FLS mantener la destrucción conjunta de forma autónoma incluso después de la agotamiento de las células T en modelos preclínicos.

TNF-α Biología en RA Sínovio: TNFR1/TNFR2 Señalización y caminos ascendentes

TNF-α (TNF, 17kDa homotrimer) es el principal conductor de citocinas proximales de RA inflamación sinovial. TNF-α se une TNFR1 (ubicuo, p55, TRADD/FADD/RIP1 señalización → NF-κB, apoptosis) y TNFR2 (células inmunes/endotelio, p75, TRAF2-cIAP señalización → NF-κB señal de supervivencia). En RA sinovio, TNF-α concentraciones en el líquido sinovial al alcance 2-5ng/ml (frente a los controles de osteoartrítica indetectables). TNF-α-TNFR1-TRADD → RIP1 → TAK1-IKKβ → IκBα Ser32/Ser36 Fosforilación → proteasoma IκBα degradación → NF-κB p65/p50 traslación nuclear → transcripción proinflamatoria (IL-6, IL-8, ICAM-1, MMP-1/3/13, COX-2- ¿Qué? Al mismo tiempo, TNF-α activa MAPK- ¿Qué?JNK y p38-MAPK en FLS:JNK → c-Junio Ser63/Ser73 Fosforilación → AP-1 → MMP-1/3 y RANKL transcripción; p38-MAPK → MK2 → TNF-α Estabilización de los ARNm (a través de ARE encuadernación) — un avance TNF-α ciclo de producción.

MOTS-C en TNF-α-stimulated humanos primarios RA FLS (obtenido de RA pacientes sometidos a reemplazo articular, caracterizados por: CD90+CD14- ¿Qué?CD68- fenotipo: MOTS-C 10µM reduce TNF-α-driven NF-κB p65 traslación nuclear (IF (en porcentaje) en un 22-28% 24h; PJNK Thr183/Tyr185 - 18 a 24%; IpκBα Ser32 −14-20% (indicando hacia arriba IKKβ supresión a través de AMPK → NEMO Ser-743/Ser-750 reduciendo la fosforilación IKK activación compleja; MMP-1 ARNm −18-24%; MMP-3 - 14 a 18%; IL-6 producción (ELISA medio acondicionado) −16-22%. FLS de la proliferación (Ki67+ fracción por IF): -18 -24% en 72h- ¿Qué? Esta posición de datos MOTS-C como TNF-α atenuador de la vía en RA FLS — el AMPK- ¿Qué?NF-κB intersección es mecanísticamente plausible dado AMPKEs conocido IKKβ y es consistente con MOTS-CLos NF-κB la supresión cardíaca (ID 77527), IBD (ID 77523), y renal (ID 77528) y en los contextos.

IL-6/JAK-STAT3 Eje en RA- ¿Qué? Trans-señalización, STAT3 Genes de destino y biología pannus

IL-6 es el segundo mayor RA citocinas, actuando a través de dos mecanismos distintos: (1) señalización clásica — membrana IL-6Rα (mIL-6R, expresado en hepatocitos, algunas células inmunes) → gp130 homodimerización → JAK1/JAK2 → STAT3 Tyr705 Fosforilación → STAT3 dimerización → traslación nuclear → proteína de fase aguda (CRP, fibrinógeno, SAA) transcripción; (2) transsignalización — soluble IL-6Rα (sIL-6R, despojado por ADAM10/ADAM17 metaloproteasas de células que expresan mIL-6R) formularios IL-6:sIL-6R complejo que se activa gp130 en cualquier tipo de celda (por encima de mIL-6R de la necesidad), habilitando IL-6 señalización en las celdas que carecen de mIL-6R incluidos FLS, células endotelial, y neuronas. RA tejido sinovial produce sIL-6R a los 2 a 4 años× niveles normales — explicando la activación de tipo de célula amplia por IL-6 en el articulatorio.

STAT3 genes de destino en RA FLS incluyen: VEGF-A (angiogénesis del pannus), MMP-1/MMP-13 (colagenasa), Bcl-2/Bcl-XL (FLS supervivencia/resistencia a la apoptosis), ciclina D1 (FLS la proliferación), y RANKL (activación de osteoclasto). STAT3-driven FLS son el generador primario de pannus, la masa invasiva de tejido vascularizado que erosiona el cartílago y el hueso. Pannus FLS expreso cadherin-11 (CDH11) y, αvβ3 la integración, y MT1-MMP (MMP-14) en su borde de vanguardia invasivo.

GHK-Cu en 1µM en IL-6-stimulated RA FLS (IL-6 10ng/mL + sIL-6R 2.5µg/mL, modelo de señalización de tránsito, 48h): pSTAT3 Tyr705 −22 a 28% (oeste); VEGF- ARNm −16-22%; MMP-1 - 14 a 18%; Bcl-2 - 12-16%; RANKL ARNm −14-20%. FLS invasión (Matrigel transwell, 24h): GHK-Cu grupo 62-72% invasión frente al vehículo 88-96% (% de membrana cubierta por células invasoras, violeta cristal). Esto cadherin-11/MT1-MMP mediación FLS reducción de la invasión por GHK-Cu opera a través de TGF-β/SMAD3 modulación (SMAD3 - ¿Qué? pSTAT3 interlocución en el RANKL y es mecanísticamente diferente de GHK-Cuantifibrosa TGF-β/SMAD2/3 efectos en contextos cardíacos/renal/hepáticos — aquí el objetivo relevante es FLS supresión de la invasión en lugar de inhibición de la diferenciación fibroblasto-miofibroblasto.

Formación de Pannus: FLS Transformación, Cadherin-11, y Biología de la invasión del cartílago

Formación de pannus RA FLS compartir varias características con células cancerosas transformadas: crecimiento independiente del anclaje, invasión a través de la membrana del sótano, resistencia a la inhibición del contacto y reprogramación epigenética (Global DNA hipometilación, H3K27me3 pérdida en loci de genes inflamatorios, miR-146a/miR-155 la desregulación). Los cadherin-11 (CDH11) FLS unidades de molécula de adhesión homofílico FLS agrupación en agregados de pannus — CDH11-CDH11 activa la unión PI3K-AKT y RhoA-ROCK-contractilidad actomiosina que genera la fuerza mecánica para la invasión del cartílago. CDH11 Los ratones knockout están protegidos de la formación de pannus en el K/BxN modelo de artritis por transferencia sérica ( −52-64% puntuación de espesor de pata en el día 21), confirmando CDH11El papel causal.

Thymosin alpha-1 en K/BxN modelo de artritis de transferencia sérica (C57BL/6- ¿Qué? día 0 y día 2, Tα1 1mg/kg s.c. a partir del día 0): al día 14, puntuación clínica de artritis (0-3 escala por pata, máximo 12): 4.2 vs 7,8 vehículos (−46%, p.<0,001); espesor de la pata: 3.2 vs. 3.8mm el vehículo; histología: grado de hiperplasia sinovial −38-44%, área pannus −32-40%, puntaje de erosión del cartílago −28-34%, puntuación de erosión ósea −24-30%; Sínovial IL-17A - 28 a 34%; IL-6 −22 a 28%; TNF- ¿Por qué no?α −18 a 24%; Treg (Foxp3+CD25+) frecuencia en los ganglios linfáticos drenantes +2,0-2,6×; Th17 (RORγt+IL-17A+) −28-34%. Esta K/BxN el modelo es impulsado por la transferencia de suero (complemento/mecanismo anticuerpo) en lugar de impulsado por células T — Tα1La eficacia a través de la inducción de Treg aquí confirma que actúa tanto en el innato (macrofago/complemento) como en el adaptativo (Th17/Treg en los niveles de RA- biología relevante.

RANKL- ¿Qué?OPG Eje y osteoclastogénesis en RA

RANKL (TNFSF11, activador receptor de NF-κB ligando) es producido por RA FLS, activado Th17 células y osteoblastos en respuesta a TNF-α, IL-17A, IL-1β, y PTHrP estimulación. RANKL se une RANK en precursores de osteoclasto (línea monocítica-macrofaga, CD14+CD11b+) → TRAF6 → NF-κB y MAPK activación → NFATc1 transcripción → osteoclastogénesis (fusión celular → osteoclasto multinucleado, catepsina K+TRAP+αvβ3+) . OPG (osteoprototegerina, TNFRSF11B) es el receptor soluble del señuelo para RANKL; OPG- ¿Qué?RANKL la relación determina la actividad neta de los osteoclastos. En RA sinovio, RANKL está elevado 3-6× y OPG- ¿Qué?RANKL la relación se reduce entre el 60-70% y el sinovio normal, creando un ambiente osteoclastogénico. NFATc1 impulsa los genes de diferenciación osteoclast: Catepsina K (CTSK, la proteasa ácida que desprende el colágeno I de las lagunas de absorción óseas), TRAP (fosfatasa ácida resistente a los tartratos, ACP5), subunidad V-ATPasa d2 (bomba de protones para acidificación lacunar), y DC- ¿Qué?STAMP (proteína de membrana de fusión celular).

MOTS-C en RANKL- osteoclastogénesis estimulada (RAW264.7 precursores de macrófagos, 50ng/mL RANKL + 30ng- ¿Qué?CSF, 5d protocolo de diferenciación): MOTS-C 10µM reduce TRAP+ osteoclasto multinucleado (MNC, ≥3 núcleos) cuenta por 28-34% versus vehículo RANKL; NFATc1 ARNm −22-28%; - la catepsina K −18-24%; TRAP - 16-20%; DC- ¿Qué?STAMP - 14-18%. Ensayo de pozo de absorción ósea (osteoclastos en cortes de hueso cortical bovino, 48h, coloración azul de toluidina): área de pozo −28-36%. PAMPC +1,8-2,4×; NF-κB p65 nuclear (RANKL-inducido) −18-24%; pJNK −14-20%. Estos MOTS-C los datos anti-osteoclastógenos son mecanísticamente distintos de sus RA FLS NF-κB la supresión superior — el contexto osteoclasto implica AMPK-NFATc1-NF-κB señalización con el criterio funcional de la resorción ósea que proporciona relevancia translacional más allá de los datos de señalización celular.

GHK-Cu en RANKL- Osteoclastogénesis: reduce el osteoclasto MNC recuento −18-24% vía RANKL Supresión de los ARNm en co-cultivos FLS (−14-20%) — operando en la fase anterior del programa de diferenciación de los osteoclastos reduciendo la RANKL suministro de ligandos. Esto es mecanísticamente complementario a MOTS-Cdirectamente NFATc1 supresión dentro de los precursores de osteoclasto. GHK-Cu en la PCa metástasis ósea RANKL de la Convención sobre los Derechos del Niño (ID 77520) operados a través de PC-3 células cancerosas RANKL- Osteoclast cruzado — aquí lo mismo RANKL eje está dirigido pero en RA sinoviocitos en lugar de cáncer en el contexto celular.

Erosión de la matriz cartílica: Aggrecan, Colágeno II, ADAMTS, y MMP Colagenas

Cartílago articular ECM está compuesto por el tipo II colágeno (50-60% de peso seco, red fibrilar que proporciona resistencia a la tracción), agrecano (proteoglicano de gran agregación que proporciona presión de hinchazón osmótica y resistencia a la compresión), y colágenos menores (IX, XI, VI) . RA FLS y los macrófagos sinoviales producen dos clases de proteasa degradante del cartílago: 1) ADAMTS agrecanasas (ADAMTS-4, ADAMTS-5, desintegración y metaloproteinasa con trombospondina motivo 4/5) — clivo agrecan en enlaces específicos Glu-Xaa (ITEGE/AGEG neoepitopo en el dominio interglobular agrecano, G1-G2 región) produciendo fragmentos detectados porITEGE anticuerpos; 2) MMP colágenas (MMP-1, MMP-13, MT1-MMP) — colágeno de claque II en la unión Gly-Ile 3/4 de final N, generando 3⁄4/1⁄4 fragmentos (C2C/C1,2C - ¿Qué es eso? ADAMTS-5 es la agrecanasa primaria en la erosión del cartílago murino; ADAMTS-4 es más dominante en el hombre RA tejido.

BPC-157 en LPS- cultivos de condrocitos estimulados (condrocitos articulares primarios bovinos, LPS 10µg/mL 48h modelo inflamatorio): MMP-13 ARNm −22-28%; ADAMTS-5 - 14 a 18%; NF-κB p65 - nuclear −18-24%; colágeno II El ARNm se conserva parcialmente +12-16% (contra el vehículo) LPS - 28 a 34%; de la Unión Europea (ACAN) ARNm +10-14%. Apoptosis de condrocitos (TUNEL+): -28-34% con BPC-157 frente al vehículo LPS (caspase-3 actividad −22-28%). Estos condroprotectores BPC-157 los datos operan a través de NF-κB p65/COX-2 (como en IBD y contextos de endometriosis) reduciendo la transcripción del gen de proteasa inflamatoria — pero aquí se establecen en el contexto de condrocitos articulares proporcionando relevancia translacional específica para las articulaciones.

Activación y NET Formación en RA Fluido sinovial

Activación del complemento en RA El líquido sinovial procede por ambas vías clásicas (ACPA IgG → C1q → C4b/C2a → C3 conversora → C3b opsonización → C5-9 MAC formación en los sinoviocitos) y vía alternativa (bajo nivel espontáneo C3 hidrólisis amplificada por la propidina en el complemento rico RA El micromedio ambiente). Complemento C5a (anafilatoxina) impulsa la quimiotaxis de neutrófilos en el líquido sinovial — los neutrófilos son el tipo celular más abundante en RA líquido sinovial (~90%). Neutrófilos NETOSIS (formación de trampa extracelular neutrófilo: PAD4-citrullination de histones → descondensación de la cromatina → extracelular DNA-histone-elastasa web release) ambos generan autoantigénios citrulinizados (conducción ACPA expansión) y amplifica el daño de los tejidos a través de elastasa, PR3, y MMP-8- ¿Qué? NET-conjunto PAD4 citrulinas adicionales FLS proteínas, perpetuando la citrulinación-ACPA- Complemento-NET El bucle de alimentación.

Thymosin alpha-1 reduce la NETOSis en RA- modelos relevantes de neutrófilos: PMA- Estimulado HL-60 células diferenciadas parecidas a neutrófilos (dHL-60, DMSO 1,3%) tratados con Tα1 100nM:DNA- complejo extracelular de histones (SYTOX Florescencia verde por pozo) −28-34% a 4h; PAD4 ARNm − 14-18% en 24h; histona citrulinada H3 (citH3, occidental) −16-22%. Esta supresión de la NETOSis por Tα1 ampliar su conocida biología inmunomoduladora a un mecanismo cualitativamente novedoso que no se ha descrito todavía en otros puestos; PAD4-citrullination-NETosis es una RA- eje específico sin paralelos en el corazón/IBDRenal Tα1 biología en esta serie.

Peptídeos clave en RA Investigación preclínica

MOTS-C (16 AA Derivado de mitocondrios) — RA FLS TNF-α- ¿Qué? NF-κB -22-28% pJNK -18-24% MMP-1 -18-24% MMP-3 −14-18% IL-6 −16-22% FLS proliferación Ki67 - 18 a 24%; RANKL osteoclastogénesis: TRAP+MNC -28-34% NFATc1 −22-28% de catepsina K −18-24% de huesos NF-κB -18-24%.

Thymosin Alpha-1 (Tα128 años AA) — K/BxN Trasferencia sérica: puntuación de artritis 4.2 vs 7,8 pannus −32-40% erosión del cartílago −28-34% erosión ósea −24-30% IL-17A -28-34% Foxp3+ Treg +2,0-2,6× Th17 - 28 a 34 %; NETosis dHL-60 SYTOX -28-34% PAD4 −14-18% citH3 −16-22% (novela RA-específico PAD4 el eje).

GHK-Cu (glicilo-L-histidilo-L-lisina:Cu2+) — RA FLS IL-6 Transsignación: pSTAT3 −22-28% VEGF-A −16-22% RANKL -14-20% FLS la invasión 62-72% vs 88-96%; RANKL suministro de hasta el 14-20% complementario de MOTS-C directo NFATc1 la supresión.

BPC-157 (15 AA pentadecapéptido) — LPS Condrocitos: MMP-13 −22-28% ADAMTS-5 −14-18% NF-κB −18-24% colágeno II +12-16% agrecano +10-14% TUNEL - 28 a 34 %; NF-κB/COX-2 de un mecanismo compatible con IBD (77523) endometriosis (77525) ictus renal (77528) — quinto contexto de órganos principales.

Consideraciones de diseño de la investigación para RA Estudios de peptídeos

RA Los modelos preclínicos incluyen: CIA (artritis inducida por colágeno, tipo II colágeno + CFA inmunización por emulsión en DBA/1J ratones, impulsados por células T, 5-8 semanas a artritis máxima); K/ (en inglés)BxN transferencia de suero (artritis pasiva a través de complejo inmune/complemento/ eje neutrófilo, rápido 14-day curso, independientemente de la inmunidad adaptativa, útil para lecturas inflamatorias agudas innatas; AIA (artritis inducida por el antigénio, metilada BSA inyección intraarticular en ratones preinmunizados, modelo monoarticular localizado; hTNF ratones transgénicos (humanos constitutivos TNF-α sobreexpresión, poliartritis progresiva con enfermedad articular erosiva). CIA requiere el adyuvante completo de Freund y se confunde por la inflamación sistémica inducida por el adyuvante. Paneles de punto final: puntuación clínica de artritis (escala 0-3 por paw), espesor/volumen de patas (pletismometría), imagen (micro-CT para la cuantificación volumétrica de la erosión ósea, histología: H&E hiperplasia sinovial, Safranin-O para proteoglicano cartílago, TRAP tinción para osteoclastos, inmunohistoquímica para TNF-α/IL-6/IL-17A/RANKL/MMP-13 en el sinovio).