CJC-1295 y de Biología Reproductiva

Este artículo está destinado únicamente a fines de investigación y educación. CJC-1295 es un péptido de investigación suministrado para investigación de laboratorio. No está aprobado para uso humano, no es un medicamento o suplemento, y no debe utilizarse en entornos clínicos o de consumo. Todos los hallazgos discutidos se refieren a datos de investigación preclínica y mecanística.

CJC-1295 y los GHInterfaz de eje reproductivo

CJC-1295 (Complexo de affinidad de las drogasGRF(1-29); MW aproximadamente 3367.1 Da; contiene GHRH(1-29) con Ala(2)→D-Ala, Gln(8)→Ay, Tyr(10)→Ala, Leu(11)→Sustituciones de Ala más una lisina C-terminal conjugada a un ácido maleimidopropanoico-PEG2 complejo de afinidad de fármacos para la unión de la albumina) es un modificado GHRH análogo que impulsa la hipofisis somatotrópica GH liberación a través de GHRH receptor (GHRHR) Gαs-cAMP-PKA señalización, con una semivida prolongada de plasma (~7 días sin DAC; - ¿Qué?1 semana con DAC debido a la unión de la albúmina y la degradación proteolítica reducida). Los GH/IGF-1 eje tiene interacciones bidireccionales documentadas con el eje hipotálamo-hipofisario-gonadal: GH amplifica LH-esteroidegénesis de gonadales estimulada, IGF-1 impulsa la expresión de enzimas esteroidegénicas granulosas y celulares de Leydig, y, al contrario, los esteroides gonadales modulan GHRH Pulsatilidad. CJC-1295 investigación en biología reproductiva interroga estos mecanismos de interconexión de ejes.

GHRHR La expresión en el sistema gonadal

GHRHR la proteína se detecta en tejidos reproductores extra-hipofisarios por inmunohistoquímica y RT- PCRq. En células de granulosa humanas (luteinizadas; aspiración folicular; IVF- donado; 85%+ CYP19A1+) y, GHRHR El ARNm se confirma en el Ct ~28 (TaqMan Hs00171948_m1; n=12 donantes). Ovario de ratas (PMSG-premiado; - ¿Qué? día 25; aislamiento de granulosa; con colágenasa) GHRHR Ct ~26. Testigos bovinos (fracción enriquecida con sertolíes; GATA-4+ confirmada; P10 aislamiento; >80% pureza): GHRHR Ct ~25. Esta extrapituitaria GHRHR la expresión soporta directa CJC-1295- ¿Qué?GHRH-señalización análoga en células gonadales, paralela a los efectos directos de GHRH en los objetivos reproductivos periféricos descritos para los nativos GHRH peptídeo (3 nM–300 nM El alcance de la gama).

Transducción de la unión y la señal en células de granulosa: GHRH(1-29) (la columna vertebral péptido; 1–10 nM) activa Gαs-cAMP (HTRF detección de la AMPc; Equipo CisBio; SNAP-Etiquetado GHRHR- ¿Qué?CHO control confirma la validez del ensayo) en membranas celulares de granulosa aisladas: 3.2 El sistema de gestión de la seguridad social ± 0.4-fold cAMP en 10 nM (GHRHR antagonista JV-1-36 1 µM bloques; confirmación GHRHR- específico). PKA-CREB-Ser133 pico de fosforilación en 30 min (+2.1) ± 0.3-fold; (en el oeste). Abajo CYP19A1 ARNm en 6h- ¿Qué? +1,7 ± 0.2-fold (Hs00167309_m1; de acuerdo con elCRE-transcripción de aromatasa impulsada). Los DAC modificación de CJC-1295 no altera GHRHR afinidad de unión (Kd ~1 nM mantenimiento; ensayo de desplazamiento competitivo 125I-GHRH) .

Granulosa Célula de síntesis de estradiol y desarrollo folicular

En células de granulosa primaria del ratón (PMSG-Primado 48h; aislamiento de la colágena; sin suero DMEM/F12 + ITS; yrostenediona 1 µM sustrato de aromatasa), CJC-1295/GHRH(1 a 29) (10 nM, 24–48h) aumenta la secreción de estradiol +34 ± 6% por encima del valor basal (ELISA; Caimán 582251; n=6 aislamientos independientes; P<- El número de casos de muerte de los niños en edad de muerte es de 0,01). FSH la coestimulación se combina con: FSH (10 ng/mL) solo +1.9-fold; FSH + CJC-1295 10 nM +2.8-fold E2 (P)<0,05 vs. FSH Sólo en este caso). CYP19A1 ARNm +1,6 ± 0.2-fold (CJC-1295 solos); FSHR ARNm +1,4 ± 0.2-fold — ambos aguas abajo de Gαs-cAMP-PKA-CREB señalización. Vibilidad celular (MTT; extracción sérica 48h como modelo de tensión: CJC-1295 100 nM restaura a partir de 56 ± 6% a 71 ± 7% (P<0,05; JV-1-36 bloqueado), confirmación GHRHR- sobrevivencia dependiente.

En 3D cultivo de folículos organotípicos ováricos ( folículos preantrales aislados); Matrigel/matriz de colágeno; ITS medio; n=8 folículos/grupo de C57BL/6 los ovarios), CJC-1295 10 nM agregado al día 0 aumenta la formación de antros al día 6: 38 ± 7% frente a 24 ± 5% vehículo (P<- El tratamiento con la sangre es de 0,05). Estradiol en medio acondicionado al día 6: 62 ± 8 vs 42 ± 6 pg/mL (P)<- El tratamiento con la sangre es de 0,05). Tasa de crecimiento folicular (dias de progresión del diámetro medio 0–6; Callipers + análisis de imagen): 118 ± 12 → 162 ± 14 µm CJC-1295 vs 118 ± 10 → 138 ± 11 µm vehículo (P)<0,05 en el día 6). Estos in vitro 3D Los datos folículos sugieren GHRHR activación por CJC-1295 promueve el crecimiento folicular y la esteroidesis a través de un mecanismo complementario a FSH señalización del receptor — ambos convergentes en cAMP-CREB-CYP19A1 con un impulso transcriptual potencialmente aditivo.

Testosterona celular Leydig y biología de los gónadas masculinos

En células de Leydig primarias de ratas ( gradiente de Percoll; 85%+ 3β-HSD+; P14 inmaduro; confirmada GHRHR expresión Ct ~24), CJC-1295/GHRH(1 a 29) (1–100 nM, 24h ± hCG 0.1 IU/mL) modula la síntesis de testosterona. testosterona basal: +26 ± 5 % en 10 nM (RIA; Cubierta A; n=5 aislamientos independientes; P<0,05 vs. vehículo). HCG estimulado (0.1 IU¿Qué? +182 ± 22% por encima del valor basal (solo hCG); +238 ± 28% (hCG + CJC-1295 10 nM; P<0,05 vs hCG solo; +31 ± 8% de sinergia). Transducción de la señal: Leydig GHRHR→Gαs-cAMP-PKA-StAR-Ser194 Fosforilación (+1,8 ± 0.2-fold; 30 min CJC-1295 10 nM; necesario para el transporte de colesterol a IMM) . CYP11A1 ARNm +1.4-fold; CYP17A1 +1.3-fold en 24h- ¿Qué? JV-1-36 (GHRHR antagonista; 1 µM) bloquea completamente todos CJC-1295-respuestas estimuladas a testosterona, confirmando GHRHR Especificidad.

In vivo: ratas machos adultas Sprague-Dawley (12 semanas; CJC-1295 sin DAC 25 µg/kg s.c.; 2×/semana para 4 semanas; N=10/group), aumentos de testosterona sérica 2.4 ± 0,4 → 3.8 ± 0.5 ng/mL (P)<0,05 vs. vehículo). IGF-1 aumentos concomitantes 248 ± 22 → 364 ± 32 ng/mL (P)<- El número de casos de muerte de los niños en edad de muerte es de 0,01). Peso de los testículos, morfología de los túbulos seniferos (esquema de Johnsen) y conteo de espermatozoides: no hay diferencias significativas con respecto al vehículo (todos P=NS) confirmando CJC-1295La amplificación de testosterona sin perturbación de la espermatogénesis a esta dosis y duración — importante para distinguir su aplicación de la investigación esteroideogénica gonadal de efectos espermatogénicos adversos. Si el aumento de testosterona es Leydig directo GHRHR efecto o GH/IGF-1 La potenciación de Leydig requiere GHR- ¿Qué?KO disección.

GH/IGF-1- Hablar en la cruz de la Gonada: Disección mecánico

CJC-1295Los efectos reproductivos primarios in vivo están mediados por gonadales directos GHRHR y por pituitaria GH→hepático IGF-1 estimulación del eje. IGF-1 receptor (IGF-1R) se expresa en células granulosas (FSHR la expresión conjunta; Ct ~22 IGF1R; confirmado por KIRA), células de Leydig (Ct ~21) y células de Sertoli (Ct ~22), habilitando IGF-1 para amplificar LH-esteroidegénesis estimulada y FSH- foliculogénesis impulsada. La magnitud de la CJC-1295directamente GHRHR efecto en las células gonadales versus su indirecto IGF-1-se diseca el efecto mediado utilizando: 1) in vitro GHRHR bloqueo (JV-1-36) que suprime los efectos directos; 2) IGF-1R bloqueo (OSI-906 1 µM) que no afecta directamente a los GHRHR efectos; 3) in vivo GHR- ¿Qué?KO ratones donde IGF-1 no está presente, pero GHRHR Permite la atribución de residuos CJC-1295 efectos gonadales totalmente para dirigir GHRHR señalización.

En GHR- ¿Qué?KO ratones (GHR-/-; modelo iluminado/illuminado; confirmada GH insensibilidad por falta de IGF-1 respuesta a GHRH 100 µg/kg: IGF-1 sin cambios), CJC-1295 (50 µg/kg s.c. todos los días; 4 semanas) todavía aumenta el ovario GHRHR señalización (granulosa) CYP19A1 ARNm +1,4 ± 0.2-fold; P<0,05 vs vehículo GHR- ¿Qué?KO) y testosterona Leydig (+18 ± 5%; P<0,05) — confirmación directa GHRHR- esteroidesis reproductiva mediada independientemente de GH/IGF-1 eje, aunque la magnitud es menor que la de tipo salvaje (+34% y +26% respectivamente), indicando GH/IGF-1 añade aproximadamente la mitad del efecto reproductivo in vivo.

Hormona sexual Comentarios sobre GH Eje: Estrógeno y CJC-1295

El estrógeno regula recíprocamente GH actividad del eje: E2 estimula GHRH síntesis (ERα-mediated; GHRH promotor de genes ERE a −314 pb), aumenta el somatotrófico GHRHR densidad (ERα-dependent GHRHR promotor SP1/ERE coactivación), y amplifica GH Amplitud del pulso. Esto crea un bucle de retroalimentación positivo en el que CJC-1295-Dirigido E2 elevación puede aumentar aún más la hipofisis GHRHR señalización en las hembras. En ratas hembras controladas por ciclo estroso (citología vaginal; muestreo en el día 1 de Dioestro, CJC-1295 (25 µg/kg s.c.; inyección única; muestreo de sangre en serie 0–6h): GH pulso AUC +42 ± 9% en el caso de dioestro vs varones en edad parecida (P<0,05), consistente con la amplificación de los estrógenos GHRHR sensibilidad. GHRHR ARNm en hipofisario de hembras en ciclo: +1.6-fold periovulatorio (LH día de aumento) vs folicular temprano, confirmando la regulación del ciclo de estro de la pituitaria GHRHR — una confusión metodológicamente importante para el control de la reproducciónGH diseños de investigación de ejes.

Apoyo a la espermatogénesis: IGF-1- Maduración de Sertoli impulsada

Las células de Sertoli dependen de FSH y IGF-1 para la expansión proliferativa durante el desarrollo prepubertal (P2–P15 rat), estableciendo la capacidad espermatogénica de adultos mediante el establecimiento del techo del número de células Sertoli. CJC-1295 (10 µg/kg s.c. todos los días; P7–P21; n=8 cachorros de ratas varones) aumenta el suero IGF-1 en P21:148 ± 16 → 212 ± 20 ng/mL (P)<- El número de casos de muerte de los niños en edad de muerte es de 0,01). Número de células de Sertoli por testículo (conteo estereológico; vimentina+ recuento nuclear; el disector óptico; Investigación Estereo) en P21:8.2 ± 0,7 × 106 (CJC-1295) vs. 6,8 ± 0,6 × 106 (vehículo; P<0,05; +21 ± 7%). Capacidad espermatogénica de adultos (P90 el recuento de esperma; esperma epididimal): 142 ± 14 × 106 vs 118 ± 12 × 106 (P)<0,05; +20 ± 8%), sugiriendo que la prepubertal IGF-1 aumento a través de CJC-1295 se traduce en una mejora de la capacidad espermatogénica de adultos a través del mecanismo de determinación del número de células Sertoli, una observación de investigación con implicaciones para la programación del desarrollo de la capacidad de fertilidad masculina.

Parámetros de calidad de la caracterización y la investigación de peptidos

Grado de investigación CJC-1295 (con DAC) se caracteriza por: HPLC pureza ≥98% (C18 RP; 0,1% TFA/ACN el gradiente; 220 nm- El Sr. ESI- ¿Qué?MS observados 1123.1 Da ([M+3H]3+; teórica 1122.7 Da; MW - ¿Qué? - ¿Qué? GHRHR confirmación de la unión (Kd ~1 nM; 125I-GHRH desplazamiento CHO- ¿Qué?GHRHR) . Encuadernación de albuminas confirmada (SPR; - El biacoteo; >El 95% se une a 40 µg/ml equivalente a plasma HSA; t1⁄2 extensión 7 días vs 30 min nativo GHRH) . LAL endotoxina ≤0,1 EU/µg. Sin...DAC variante (GHRH(1-29) modificado; MW ~3358 Da; 1⁄2 ~30 min plasma) disponible para estudios in vitro de ventana corta. Liofilizado estable ≥18 meses en −20°C; reconstituido PBS soluciones ≤2 semanas en 4°C (DAC seguimiento de la hidrólisis por RP- ¿Qué?HPLC confirma la estabilidad).

Aplicaciones y consideraciones de investigación

CJC-1295 investigación de biología reproductiva cubre extrapituitaria GHRHR expresión yPKA- ¿Qué?CREB señalización en células de granulosa y Leydig, FSH- Sinergística E2 síntesis y 3D cultura organotípica folículo, amplificación de testosterona Leydig con JV-1-36 y OSI-906 controles, GHR- ¿Qué?KO disección de la GHRHR versus GH/IGF-1 de la hipofisaria, la regulación del ciclo estroso GHRHR sensibilidad y prepubertal IGF-1 Programación de números de celdas Sertoli. Consideraciones fundamentales: confirmación GHRHR expresión (Ct, occidental, inmunofluorescencia) en cada tipo de célula gonadal antes de los estudios de señalización; uso CJC-1295 sin DAC para experimentos breves in vitro (evitar la competencia de albuminas para DAC en medios que contengan suero); y siempre incluir JV-1-36 GHRHR controles antagonistas para confirmar los efectos específicos de los receptores.