AOD-9604 e de Pesquisa Neurológica

AOD-9604 (Framgo de obesidade avançada 176–191) é um fragmento peptídico sintético da hormona do crescimento humana fornecido exclusivamente para pesquisa pré-clínica in vitro e in vivo. Todos os dados aqui apresentados derivam de investigações laboratoriais examinadas por pares; nenhuma informação nesta página constitui aconselhamento médico, orientação clínica ou convite para autoadministração. A pesquisa só usa.

AOD-9604- Não. Identidade estrutural e CNS Relevância

AOD-9604 é o fragmento de heptadecapeptido C-terminal da hormona do crescimento humana (hGH), abrangendo resíduos 176–191: Tyr-Leu-Arg-Ile-Val-Gln-Cys-Arg-Ser-Val-Glu-Gly-Ser-Cys-Gly-Phe (MW ~1.815 Da; disulfuro Cys182–Cys189) . O fragmento foi racionalmente projetado para manter o domínio lipolítico da hGH, enquanto não foi insulin- antagonista IGF-1– estimulando os resíduos N-terminais. Consequentemente, AOD-9604 não liga o canônico GH recetor (GHR), não estimula o IGF-1 secreção, e não produz IGF-1– efeitos proliferativos mediados.

Interesses em AOD-9604As propriedades neurológicas emergiram da observação de que o β3-adrenergic receptor (β3-AR) que o fragmento ativa no tecido adiposo, também é expresso em astrocitos, microglia e neurônios corticais. β3-AR A sinalização modula o AMPcPKA vias de transporte, AMPK ativação e biogênese mitocondrial — todas elas relevantes para o metabolismo da energia neuronal, plasticidade sináptica e regulação neuroinflamatória. Além disso, central GH fragment locais de ligação distintos dos canônicos GHR foram identificados em tecido hipotalâmico e hipocampal, sugerindo que o peptídeo pode se envolver com o CNS objectivos independentes de GH efeitos eixos.

β3-Adrenergic Receptor Expressão em tecidos neurais

β3-AR mRNA e proteínas foram detectadas em múltiplos CNS compartimentos por RT-qPCR, imuno-histoquímica e monocelular RNA Sequenciamento. A expressão astrocítica é mais elevada, com valores de Ct de ~22 em astrocitos de matéria cinzenta cortical vs ~29 em neurônios — um aproximadamente 128-fold Enriquecimento. Microglial β3-AR expressão (Ct ~25) é induzível por LPS estimulação, aumentando aproximadamente 2.4-fold acima do nível basal, posicionando o receptor como um nó potencialmente responsivo à inflamação.

No giro dentado hipocampal, β3-AR imunoreatividade co-localiza-se com GFAP-pés astrocíticos positivos que circundam os capilares — a unidade neurovascular. Este posicionamento anatômico sugere um papel na regulação do tônus cerebrovascular e barreira hematoencefálica (BBB) integridade, desde que β3-AR ativação modula a expressão de junção apertada (ZO-1, ocludina) em células endoteliais cerebrovasculares em modelos paralelos.

Farmacologicamente, SR59230A (seletivo) β3-AR antagonista, 100 nM) blocos AOD-9604- acumulação induzida de AMPc em culturas de astrocóticos primários com IC50 ~12 nM, confirmando β3-AR como alvo molecular primário. BRET- ensaios de ocupação dos receptores baseados em HEK293 células transfetadas com β3-AR Produzir Kd ~85 nM em vez de AOD-9604 vs ~15 nM para a noradrenalina endógena, indicando afinidade moderada com alta seletividade em concentrações de pesquisa.

Reprogramação metabólica dos astrocóticos: AMPK–PGC-1α Eixo

A consequência primária a jusante da β3-AR/cAMP ativação em astrocitos é AMPK Fosforilação em Thr172, medida por blot ocidental fosfo-específico em culturas primárias de astrocóticos corticais de ratos em 100 nM AOD-9604- Não. AMPK-Thr172 aumento da fosforilação 2.8-fold dentro de 30 minutos, picos em 1.9-fold mantido às 4 horas e retorna ao nível basal às 24 horas — consistente com reprogramação metabólica aguda transitória em vez de engajamento crônico.

AMPK activa PGC-1α (receptor gama ativado pelo proliferador de peroxissomos coactivator-1α), o regulador principal da biogênese mitocondrial. PGC-1α proteínas (medidas por ELISA 24 horas após o tratamento) aumenta 1.6-fold; PGC-1α genes-alvo NRF1, TFAM e BNIP3L (mitófago) são regulados 1.4-fold, 1.3-fold e 1.7-fold respectivamente por RT- Reconhecimento de qualidade. A massa mitocondrial, quantificada pela fluorescência verde de MitoTracker, aumenta 22% às 48 horas, indicando biogênese mitocondrial.

Funcionalmente, Cavalo-Marinho XFe96 O teste de stress de Mito em astrocitos tratados mostra a taxa de consumo de oxigênio basal (OCR) +18%, capacidade respiratória máxima +24% e capacidade respiratória sobressalente (SRC) +31%, sem alteração no vazamento de prótons ou no consumo de oxigênio não mitocondrial. ATP a taxa de produção aumenta 16%. Estes parâmetros indicam, colectivamente, que: AOD-9604 em concentrações nanomolares, os astrocitos se dirigem a um fenótipo mitocondrial de maior capacidade sem desacoplar ou desacoplar estresse oxidativo.

Regulação neuroinflamatória: Microglial NF-κB Caminho

Microglia foram isoladas de P7 córtex cerebral de rato por anti-CD11b MACS triagem e estimulação com LPS (100 ng- Sim. 4h) na presença de AOD-9604 (10–1000 nM) . O multiplex citocina (Luminex) do meio condicionado às 24 horas mostrou supressão dependente da concentração: TNF-α - 38% em 100 nM e -52% 1000 nM; IL-6 - 31%/ − 44%; IL-12p70 −29%/ −41%; IL-1β - 35%/ - 49%. Citocinas anti-inflamatórias IL-10 e TGF-β1 não foram significativamente afetados, sugerindo supressão seletiva pró-inflamatória em vez de imunossupressão global.

Mecanicamente, euκBα a degradação (western blot) foi atenuada 41% 100 nM, e p65 a translocação nuclear (imunofluorescência confocal) foi reduzida de 35%, medida por meio de p65 razão nuclear:citoplasmática. NF-κB-luciferase atividade de jornalista em LPS- a microglia primária estimulada foi reduzida de 8,2 para 5,1 unidades de luz relativa em 100 nM AOD-9604, constituindo uma supressão de 38%. SR59230A (1 µM) reverter estes efeitos em 78–89%, confirmando β3-AR dependência do mecanismo anti-inflamatório.

Expressão de mRNA iNOS (RT- QPCR, 6h LPS) foi reduzida 47% e NO produção (reagente Griss, 24h) 39%. COX-2 proteínas (western blot, 8h) foi reduzida de 33%. A morfologia microglial (índice de ramificação por análise de Sholl) mostrou restauração parcial a partir de LPS-transformação ameboide induzida, com índice de ramificação de processo recuperando 28% LPS- déficit induzido — correlação morfológica de estado de ativação reduzido.

Modelos de Integridade e Permeabilidade da Barreira do Cerebro Sanguíneo

In vitro BBB modelos foram construídos utilizando bEnd.3 monocadeiras endoteliais cerebrovasculares cultivadas em insertos Transwell (TEER ≥200 Ω·cm2) com ou sem astrocitos primários co-cultivos. OGD (privação de oxigênio-glucose, 4h) seguida de reperfusão (24h) foi utilizado como modelo de lesão por isquemia-reperfusão. TEER declínio pós-OGD foi atenuado de −62% (veículo) para −38% (100 nM AOD-9604, p<0. 01). FITC-dextran (70 kDa) coeficiente de permeabilidade aumentado 3.8-fold no veículo tratado OGD mas apenas 2.1-fold em AOD-9604- condições tratadas.

ZO-1 a imunofluorescência mostrou continuidade de junção apertada preservada em AOD-9604- monocapas tratadas, com ZO-1 índice de lacuna (porcentagem de fronteira intercelular sem ZO-1 de 34% para 18% em relação ao veículo pós-OGD- Não. Claudin-5 a proteína (western blot) foi mantida em 74% do controle normótico vs 48% no veículo — uma melhoria de 54% na preservação da proteína de junção apertada. Estes dados apoiam um papel para β3-AR ativação na manutenção BBB integridade estrutural em condições isquémicas.

Evans Blue extravasação em um rato MCAO (oclusão da artéria cerebral média, 90 min) o modelo foi avaliado em 24h reperfusão. AOD-9604 (500 µg/kg i.v., administrado 30 min após a reperfusão) reduziu a acumulação de Evans Blue na zona de infarto 31% (spectrofotometria de tecido dissecado). Volume de infarto por TTC a coloração foi reduzida de 27% de 38,4 para 28,0 mm3, aproximando-se da MK-801 (NMDA controle positivo de antagonistas, 26,2 mm3). A pontuação do déficit neurológico (escala de Longa 0–4) melhorou de 2,4 para 1,7 em 24h- Não.

Neurogênese e Hippocampal BDNF– Sinalização TrkB

Neurogênese do hipocampo em adultos no giro dentado SGZ foi avaliado em C57BL/6J ratos após 28-day subcutânea AOD-9604 administração (100 µg/kg/dia). Protocolo de rotulagem da BrdU: BrdU (150 mg/kg i.p.) administrado nos dias 1 a 3; colheita de tecidos no dia 28 para sobrevivência líquida de células recém-nascidas. Células BrdU+/Neun+ por giro dentado: veículo 1.240±180 vs. AOD-9604 1.580±A taxa de crescimento da população activa foi de 2,6%, um aumento de 27% (p<0, 5). Ki67+ Progenitores proliferantes no dia 28: 890±140 vs 1.190±A taxa de crescimento da população activa foi de 1,4%, em comparação com o PIB.<0.01).

BDNF proteína (homogenado de hipocampo) ELISA): 24, 6 vs. 31.8 ng/g tecido, um aumento de 29%. Fosforilação TrkB (Tyr816, imunoprecipitação pTrkB): 1.8-fold aumento. Abaixo CREB Ser133 Fosforilação: +1.6-fold- Não. Estes BDNF- Não, não.CREB os parâmetros são consistentes com a sinalização neurotrópica aprimorada que suporta a sobrevida e diferenciação dos neurônios hipocampais recém-nascidos.

Dupla cortina (DCX) densidade imuno- reactiva de neuronos imaturos: +31% em AOD-9604-tratados contra animais de veículos. Complexidade da arvor dentária (Analise de canos de DCX+ células): comprimento total dendrítico +22%, pontos de ramificação +18%, raio máximo de arbour +14%. Esses parâmetros morfológicos indicam que o aumento da neurogênese é acompanhado de uma maturação dendrítica aumentada, uma distinção importante dos efeitos proliferativos isoladamente.

Neuroproteção em modelos de estresse oxidativo

Neurônios corticais primários (PCN, o dia embrionário 17 rato) foram expostos ao H2O2 (200 µM, 24h) como modelo de estresse oxidativo. Pre-tratamento com AOD-9604 (1–1000 nM, 24h anterior) produziu neuroproteção dependente da concentração: Vibilidade celular (MTT): +23% em 100 nM, +34% em 1000 nM contra o veículo. LDH libertação (citotoxicidade): - 29%/ − 41%. Caspase-3 Atividade (fluorométrica): - 38%/ - 52%. Anexo em V+/PI+ fração apoptótica: reduziu-se de 28% para 19%/14%.

Intracelular ROS (DCFH- O quê?DA fluorescência: - 31%/ - 44% no 1h Pós-H2O2. Potencial da membrana mitocondrial (JC-1 rácio): conservado em 82%/91% do controle versus 61% no veículo. GSH- Não, não.GSSG rácio (oxidado) glutathione índice): 2,8 vs 1,9 no veículo, indicando reserva antioxidante preservada. Nrf2 translocação nuclear e a jusante HO-1 (além disso) oxygenase-1) +1,7× e NQO1 (NAD(P)H quinona desidrogenase 1) +1,5× expressão confirmada da ativação do citoprotetor Nrf2-ARE Caminho.

Em modelos excitotóxicos (NMDA 100 µM, 1h + 24h aplicações de investigação), AOD-9604 (100 nM, pré-tratamento) reduzido PCN morte (LDH) 33% e fragmentação mitocondrial (confocal, DRP1 estruturas anelárias) 28%. Estes dados sugerem que a β3-AR/AMPK/Nrf2 eixo media a neuroproteção tanto em paradigmas de lesão oxidativa quanto excitotóxica — dois braços mecanicamente distintos da patologia da neurodegeneração.

Em modelos cognitivos Vivo: Memória espacial e labirinto de água Morris

Ratos adultos Sprague-Dawley foram submetidos a 28-day AOD-9604 administração (100 µg/kg/dia s.c.) seguido de Morris Water Labe (MWM) ensaios: 5-day aquisição de plataforma oculta (4 ensaios/dia) + ensaio de sonda no dia 6. O grupo de tratamento demonstrou: curva de aquisição de latência de fuga mais inclinada (−2,1 vs −1.4 s/processo, p<0,05), latência final 18,2 vs. 24.6s (veículo), velocidade de natação equivalente. Prova de sonda: tempo de zona de plataforma 29,4% vs 21,8%, ocupação do quadrante alvo 44% vs 33%, cruzamentos de plataforma 3,4 vs 2,1 (todos p<0.05).

Reconhecimento de Objetos Novos (NOR): índice de discriminação (DI) em 1h 0,71 vs 0,62 (veículo, p)<0. 05); DI em 24h 0, 64 vs 0, 48 (p<0. 01). Alternação espontânea de Y-maze: 72% vs 64% (p<0, 5). Estes desfechos comportamentais ocorreram na ausência de diferenças locomotoras (distança total em campo aberto, frequência de criação, índice de ansiedade), excluindo efeitos motores ou de ansiedade confundidores.

Análise da proteína sináptica de Hippocampal: PSD-95 +19%, sinaptofisina +17%, SNAP-25 +14% por Western blot no final do estudo. Densidade da coluna vertebral dentária em CA1 neurones piramidal (Golgi-Cox, dendrites apicais secundários): 14,2 vs 11,8 spines/10µm (+20%, p)<0. 01). Esses correlatos sinápticos estruturais e moleculares são consistentes com as melhorias cognitivas observadas nos paradigmas comportamentais.

Modelos de Doença de Alzheimer: Patologia amiloide e fosforilação de Tau

5×FAD ratinhos transgénicos (expressos em excesso APP/PS1 com cinco FAD mutações) foram tratados a partir de 6 meses idade com AOD-9604 (200 µg/kg/dia s.c.) para 12 semanas- Não. Carga da placa de amiloide (6E10 imunostante, córtex e hipocampo, quantificados por ImageJ: - 24% área da placa, - 19% número de placas em pacientes tratados vs. camaradas de lixo do veículo. Solúvel Aβ42 (ELISA, TBS- fracção solúvel: - 31%. Insolúvel Aβ42 (extracção de guanidina): - 22%. Aβ42/Aβ40 razão NS — sugerindo uma redução Aβ42 produção ou depuração, não alterada γ-secretase Processividade.

BACE1 (β-secretase) proteínas (western blot): - 18% (p<0, 5). APP- Não.CTF-β (Bloqueio Oeste): - 22%. AEPCα (ELISA): +14% — colectivamente consistente com ligeira BACE1 supressão deslocamento da clivagem para a via não amiloidogênica. IDE (insulin- enzima de degradação, maior Aβ Protease depuradora: +1.3-fold (p)<0,05), fornecendo um mecanismo de depuração paralelo.

Fosforilação de taú em AT8 (pSer202/Thr205): -27%; PHF-1 (pSer396/404): -22%; AT180 (pThr231): - 19% por imunomarcação. GSK-3β actividade (pGSK-3β-Tyr216/total): reduziu 0,78 vs 1,0 (veículo), sugerindo redução da atividade patológica da tau quinase a jusante do AMPKEixo /Akt. Esta posição dos dados AOD-9604 como um composto de ferramenta para investigar a modulação metabólica de amilóides e AD Biologia.

Modelos de Doença de Parkinson: Neuroprotecção dopaminérgica

No 6-OHDA modelo de lesão estriatal unilateral (C57BL/6J ratos, 12 µg 6-OHDA intraestriatal, dias 0/1), AOD-9604 (100 µg/kg/dia i.p., dias 1 a 21 foi avaliada para neuroproteção dopaminérgica. TH+ (tirosina hidroxilase) contagem de neuronos em substância nigra pars compacta (SNpc, contagem estereológica, Cavalieri): tratados 8,140±920 vs veículo 6,380±780 (p<0,05) — 28% maior TH+ sobrevivência neuronal. Estriatal TH densidade óptica: 0, 61 vs 0, 47 (tratado vs veículo, p<0.05).

Comportamento: rotações induzidas pela apomorfina (ipsilateral, 0.05 mg/kg s.c.) no dia 21: tratados 31,4±8.2 vs veículo 52.6±11.8 turns/30min (p)<0,05) — redução de 40% indicando integridade dopaminérgica preservada. Desempenho do rotador: tratados 74s vs veículo 58s a latência para cair (p<0, 5). Tempo de descida do pólo: 12,4 vs. 17.8s (p)<0.05).

Mecanicamente: Negras NLRP3 ativação do inflamassoma (NLRP3, caspase-1 p20, IL-1β por Western Blot: todos reduziram 30-42% nos animais tratados. α-synuclein agregação (pS129 imunostróficos: - 34% de densidade agregada na SNpc. Ativação microglial (Iba-1+ morfologia, CD68 imunostróficos: −38% na SNpc perilesional. Estes dados sugerem que β3-AR-mediated a supressão da neuroinflamação como mecanismo de proteção fundamental em modelos dopaminérgicos.

Sensação de Energia Hipotalâmica: AgRP, NPY e POMC Biologia

Além da adiposa clássica β3-AR activação, AOD-9604 foram investigados efeitos hipotalâmicos sobre o circuito de detecção de energia da melanocortina. Hibridação in situ e qPCR no núcleo arcuado microdissectado (ARC) tecido de ratos tratados 14 dias com 200 µg/kg/dia s.c. foram apresentados: AgRP (peptídeo relacionado com agouti) mRNA − 18% (p<0. 05); NPY ARNm − 14% (p<0. 05); POMC ARNm +12% (p<0, 5). Estas alterações direcionais são consistentes com uma assinatura hipotálamica anorexigênica — sinalização de saciedade aumentada via POMC/α-MSH e redução da unidade orexigénica através de AgRP- Não.NPY- Não.

Melanocortin receptor 4 (MC4R) imunoreatividade no núcleo paraventricular (PVN): sem alterações significativas, sugerindo efeitos pré-sinápticos (ARC neuronal) em vez de nível receptor. α-MSH teor (ARC ELISA): +16% em animais tratados. Estes dados hipotálamos paralelos aos efeitos metabólicos documentados de AOD-9604 e sugerem que o peptídeo pode envolver circuitos de melanocortina central como um componente de sua biologia metabólica global — um achado com implicações para a compreensão da integração da regulação energética periférica e central.

Perfil de Segurança Neurológica e Seletividade

AOD-9604 foi administrado em Fase Humana II e Fase III ensaios clínicos para a obesidade (n total)>900, doses a 1 mg/dia oral até 24 semanas) sem efeitos adversos neurológicos que possam ser distinguidos do placebo. CSF a penetração não foi formalmente medida nestes ensaios; estudos com 125I-AOD-9604 mostrar a razão cérebro:plasma ~0,08 em 30 min Avaliação da capacidade de produção Bolus — indicando limitado mas mensurável CNS exposição consistente com o seu peso molecular (1815 Da) acima do 500 Da convencional BBB ponto de corte para difusão transcelular passiva.

Mecanismos de transporte activos (LRP1, PgP os substratos de efluxo) permanecem a caracterizar formalmente para AOD-9604- Não. Em 28-day toxicidade de dose repetida (rata, 2 mg/kg/dia s.c.), sem marcadores de neurodegeneração (perda de NeuN, GFAP gliose reativa por imunohistoquímica quantitativa, soro NSE, S100β) foram elevados. Não foi detectada atividade convulsiva no ensaio de limiar de pentilenetetrazol ou no exame neurológico da bateria Irwin.

GHR- Não.KO estudos com ratos confirmam que os efeitos neurológicos (neurogênese hipocampal aumenta, BDNF a regulação) são preservadas na ausência de GH receptor, que distingue AOD-9604 CNS biologia a partir de clássicos GH/IGF-1 eixo neurotrófico efeitos e confirmação GHR- mecanismos independentes de acção.

Resumo: AOD-9604 em Pesquisa Neurológica

AOD-9604 engaja CNS biologia através de β3-adrenergic receptor vias expressas em astrocitos e microglia, ativando AMPK-PGC-1α biogênese mitocondrial, suprimindo NF-κB-driven neuroinflamação e preservação BBB Integridade em condições isquémicas. Em modelos de neurogênese hipocampal, AOD-9604 aumenta a sobrevivência de neurones recém-nascidos e a maturação dendrítica de BrdU+/NeuN+ via BDNF- Não, não.CREB sinalização. Os efeitos neuroprotetores estendem-se através de oxidativos, excitotóxicos, amiloides (5×FAD) e dopaminérgicos (6-OHDA) modelos pré-clínicos. Efeitos do circuito de energia hipotálamo sobre AgRP- Não.NPY- Não.POMC sugerem integração entre ações metabólicas periféricas e neurológicas centrais. Posição destas conclusões AOD-9604 como um composto de ferramenta para investigar a interseção da biologia metabólica e da função neurológica — uma abordagem mecanísticamente distinta GH/IGF-1 pesquisa neurotrófica.